二級生物安全柜是能防止實驗操作處理過程中某些含有危險性或未知性生物微粒發生氣溶膠散逸的箱型空氣凈化負壓安全裝置。其廣泛應用于微生物學、生物醫學、基因工程、生物制品等領域的科研、教學、臨床檢驗和生產中，是實驗室生物安全中一級防護屏障中基本的安全防護設備。也是藥企微生物實驗室基本的設備之一。
1、二級生物安全柜在操作前應將本次操作所需的全部物品移入安全柜，防止雙臂頻頻穿過氣幕損壞氣流；并且在移入前用70%酒精擦洗外表消毒，以去除污染。
2、翻開風機5～10分鐘，待柜內空氣凈化并氣流安穩后再進行試驗操作。將雙臂慢慢伸入安全柜內，少停止1分鐘，使柜內氣流安穩后再進行操作。
3、安全柜內不放與本次試驗無關的物品。柜內物品擺放應做到清潔區、半污染區與污染區基本分開，操作過程中物品取用便利，且三區之間無穿插。物品應盡量靠后放置，但不得擋住氣道口，防止攪擾氣流正?；顒?。
4、操作時應按照從清潔區到污染區進行，以防止穿插污染。為防可能濺起的液滴，可在臺面上鋪用消毒劑浸泡過的毛巾或紗布，但不能覆蓋住安全柜格柵。
5、柜內操作期間，禁止運用酒精燈等明火，以防止發生的熱量發生氣流，攪擾柜內氣流安穩；且明火可能損壞HEPA濾器。
6、作業時盡量削減背面人員走動以及快速開關房門，以防止安全柜內氣流不安穩。
7、在試驗操作時，不可翻開玻璃視窗，應確保操作者臉部在作業窗口之上。在二級生物安全柜柜內操作時動作應輕柔、舒緩，防止影響柜內氣流。
8、安全柜應定時進行檢測與保養，以確保其正常作業。作業中旦發現安全柜作業反常，應立即停止作業，采取相應處理辦法，并告訴相關人員。
9、作業*后，封閉玻璃窗，堅持風機繼續運轉10～15分鐘，起翻開紫外燈，照耀30分鐘。
10、安全柜應定時進行清潔消毒，柜內臺面污染物可在作業完結且紫外燈消毒后用2%的84消毒液擦洗。柜體外外表則應每天用1%的84消毒液擦洗。
11、二級生物安全柜柜內運用的物品應在消毒后再取出，以防止將病原微生物帶出而污染環境。
